Izolacja DNA z owoców

Materiały, odczynniki, sprzęt:
– materiał biologiczny (banan, kiwi, truskawka)
– płyn do mycia naczyń
– zmrożony alkohol izopropylowy lub etanol, lub denaturat
– małe woreczki strunowe
– ręczniki papierowe
– chlorek sodu
– wrząca woda
– zestaw do sączenia (np. kubek i gaziki, ręcznik papierowy)

Kolejne cele i sposób realizacji
1. Zniszczenie ścian komórkowych i ujednolicenie (homogenizacja) banana lub innego owocu
W tym celu dokładnie zmiażdż owoc (np. w woreczku strunowym) na gładką masę.
2. Rozpad błon komórkowych i jądrowych, dalszy rozpad komórek. Przygotuj bufor ekstrakcyjny. Wymieszajcie w naczyniu wodę (ok. 50 ml), płyn do naczyń (1 łyżeczkę) i sól (1 łyżeczkę). Połącz bufor z masą owocową w woreczku strunowym, wymieszaj.
3. Inaktywacja enzymów, które mogą rozkładać materiał genetyczny. DNAzy to enzymy wrażliwe na ciepło. Wstaw mieszaninę z woreczkiem strunowym do kąpieli wodnej na 3-5 minut, docelowa temperatura, którą powinna ona osiągnąć to ok 60°C.
4. Oddzielenie roztworu zawierającego DNA od zanieczyszczeń. Przefiltruj mieszaninę przez sączek laboratoryjny, filtr do kawy albo zwykły ręcznik kuchenny, lub gazik. Postaraj się nie spienić płynu. Można sączyć do docelowego naczynia, w którym będzie prowadzona ekstrakcja: probówki, plastikowego kieliszka, małej ale wysokiej zlewki. Przesączu nie musi być dużo – wystarczy warstwa wysokości ok. 1,5- 2 cm.
5. Rozpuszczenie wyekstrahowanego DNA w alkoholu izopropylowym lub etanolu. Bardzo ostrożnie dolej warstwę zmrożonego alkoholu izopropylowego lub etanolu: tak, aby powstała wyraźna granica między fazami. Obserwuj zachodzące zjawisko. DNA będzie powoli wytrącało się do warstwy utworzonej przez alkohol. Po kilku minutach będziesz mógł je bez problemu wyciągnąć (gęste, galaretowate).